（一）培養(yǎng)基的類型

　　培養(yǎng)基的種類很多，為了研究方便，通常根據(jù)培養(yǎng)基的一些性質(zhì)把它們分為不同的類型。

　　1．根據(jù)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來源不同來區(qū)分

　　(1)合成培養(yǎng)基  由已知化學(xué)成分及數(shù)量的化學(xué)藥品配制而成。它適合于某些定量工作的研究，以減少不能控制的因素。此外，培養(yǎng)自養(yǎng)菌也是用成分簡(jiǎn)單的無機(jī)鹽類配制的培養(yǎng)基。

　　(2)天然培養(yǎng)基用天然物質(zhì)或其浸出汁配制而成。肉汁、酵母浸出汁、麥芽汁、米曲汁、豆芽汁、馬鈴薯汁、麩皮等都是常用的天然營(yíng)養(yǎng)原料，適合于培養(yǎng)許多異養(yǎng)型微生物。

　　(3)半合成培養(yǎng)基由部分天然物質(zhì)和一些成分已知的化學(xué)藥品配制而成。

　　2．根據(jù)培養(yǎng)基的用途區(qū)分

　　(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基其組成物質(zhì)能基本上滿足一般微生物生長(zhǎng)繁殖的需要。它的主要作用是促使微生物良好地生長(zhǎng)。例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，是適合于細(xì)菌培養(yǎng)的一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基是適合于霉菌培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基；麥芽汁培養(yǎng)基適合于酵母菌及霉菌培養(yǎng)；高氏一號(hào)培養(yǎng)基適合于放線菌的培養(yǎng)。

　　(2)富集培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入某些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如血液、血清、酵母膏或其他生長(zhǎng)因子而成，用以培養(yǎng)某些對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較特殊的微生物。例如有些霉菌缺乏一種或數(shù)種氨基酸合成的能力，則培養(yǎng)時(shí)在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的氨基酸或適量的蛋白胨，就可使這些霉菌正常生長(zhǎng)。

　　(3)選擇培養(yǎng)基它是根據(jù)微生物對(duì)某一化學(xué)物質(zhì)的不同抗性或?qū)δ撤N營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特殊需求而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，常被用來分離某一種或某一類特定的微生物。例如含有青霉素或鏈霉素等抗生素的培養(yǎng)基，可以從混雜的微生物群體中，分離出霉菌或酵母菌；用纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基，可分離得到分解纖維素的微生物。

　　(4)鑒別培養(yǎng)基主要用于菌種的鑒定。這種培養(yǎng)基中含有某些化學(xué)藥品或指示劑，當(dāng)某種微生物在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，可表現(xiàn)出一種特殊的特征，使不同種類的微生物被區(qū)分開。

　　3．根據(jù)培養(yǎng)基的狀態(tài)區(qū)分

　　根據(jù)培養(yǎng)基制成后的狀態(tài)，可將培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。它們之間的區(qū)別在于是否加有凝固劑以及凝固程度�？勺鳛榕囵B(yǎng)基凝固劑的物質(zhì)主要有瓊脂、明膠、硅膠等。瓊脂是目前比較理想的凝固劑，它是從海藻中提取的一種多糖，不被絕大多數(shù)微生物所分解利用，具有較高的熔點(diǎn)（96℃以上），較低的凝固點(diǎn)(40℃)，且對(duì)微生物沒有毒性。固體培養(yǎng)基一般加瓊脂1.5%~2.0%，半固體培養(yǎng)基一般加瓊脂0.2%~0.7%，液體培養(yǎng)基中則不加凝固劑。用一些天然固形物作培養(yǎng)基時(shí)，也稱為固體培養(yǎng)基。各種狀態(tài)培養(yǎng)基的用途如下：

　　(1)固體培養(yǎng)基可以使所培養(yǎng)的微生物形成肉眼可見的菌落。在微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和保藏等方面都采用這種培養(yǎng)基。

　　(2)半固體培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)室中主要用來培養(yǎng)細(xì)菌，觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)特性等。

　　(3)液體培養(yǎng)基容易使培養(yǎng)體系內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)保持均勻狀態(tài)，有利于微生物充分利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，積累代謝產(chǎn)物，所以在實(shí)驗(yàn)室和發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛采用。

　�。ǘ�）制備培養(yǎng)基的一般原則

　　(1)所有微生物的培養(yǎng)基都應(yīng)包含有碳源、氮源（有機(jī)氮、無機(jī)氮）、水及無機(jī)鹽類，有些微生物生長(zhǎng)還需要某種特殊的生長(zhǎng)素。

　　(2)根據(jù)培養(yǎng)微生物的目的來選擇合適的營(yíng)養(yǎng)物。例如能利用纖維素的微生物在以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)；但如果是為了獲得纖維素酶，則培養(yǎng)基中的碳源應(yīng)該選用纖維素，以利于誘導(dǎo)細(xì)胞合成纖維素酶。

　　(3)在不影響培養(yǎng)效果的前提下，還應(yīng)從經(jīng)濟(jì)、易得、配制方便等方面加以考慮選擇培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。這方面，在配制工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)尤為重要。

　 （4）各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)必須適量添加，合理配比。培養(yǎng)基中碳源和氮源的含量及比例對(duì)微生物的生長(zhǎng)、代謝都有很大的影響。過高或過低的碳源和氮源含量都會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)。在配制培養(yǎng)基時(shí)考慮更多的是碳源和氮源含量的比值，即C/N的問題。就一般菌體培養(yǎng)而言，細(xì)菌、酵母菌需要較多的氮素營(yíng)養(yǎng)物，培養(yǎng)基的C/N在5:1左右；霉菌則需要較多的碳素營(yíng)養(yǎng)物，培養(yǎng)基的C/N在10:1左右。對(duì)于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)，則要通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的C/N來控制微生物的代謝。各種礦質(zhì)元素的含量，也要嚴(yán)格控制和均衡，某種單一元素含量過高，可影響其他礦質(zhì)元素的吸收，甚至對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用。配制培養(yǎng)基時(shí)，通用一些多功能的無機(jī)鹽提供礦質(zhì)元素。例如將適量KH2P04和Na2HPO4添加到培養(yǎng)基中不僅可作為微生物K、Na、P這三種礦質(zhì)元素的來源，而且這兩種鹽還可作為緩沖劑，穩(wěn)定培養(yǎng)基的酸堿度。

　�。�5）各種微生物都有一定的生長(zhǎng)pH范圍和最適的生長(zhǎng)pH。因此必須把培養(yǎng)基的pH調(diào)到微生物適宜生長(zhǎng)范圍。一般來說，細(xì)菌適宜于中性至偏堿性的環(huán)境，其生長(zhǎng)的pH范甚多在4~10，最適生長(zhǎng)pH通常為7.0~7.5；酵母菌和霉菌適宜生長(zhǎng)在偏酸性的環(huán)境中，其生長(zhǎng)pH范圍多在1~8，最適生長(zhǎng)pH多為4.5～6。

　　（6）培養(yǎng)基的滲透壓是由各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度決定的。大多數(shù)微生物在正常營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度的滲透壓下就能良好生長(zhǎng)；但有的微生物的生長(zhǎng)需要有較高的滲透壓。為此，可額外加入些糖或無機(jī)鹽來調(diào)節(jié)滲透壓。發(fā)酵工業(yè)上高濃度的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)有利于增加產(chǎn)量和提高設(shè)備的利用率，但過高的滲透壓會(huì)抑制菌體生長(zhǎng)，所以要根據(jù)生產(chǎn)菌的滲透壓特性，來配制適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)物濃度的基質(zhì)。

　　（三）培養(yǎng)基的制備方法

　　培養(yǎng)基種類很多，釀酒工業(yè)上培養(yǎng)霉菌及酵母菌一般均采用自然培養(yǎng)基。下面是幾種釀酒常用養(yǎng)基的配制方法。

　　1.米曲汁培養(yǎng)基的制備

　　將洗凈的大米，常溫下浸泡，將水濾去后，蒸米40min，取出加一定量的冷水，并將米粒搓散，再蒸，散冷后接種黃曲霉或米曲霉的三角瓶原菌，在保溫箱中培養(yǎng)，待米粒變黃未生出孢子時(shí)，取出干燥備用；取米曲于4倍水中，于60℃糖化3～4h。用碘液試之不呈藍(lán)色反應(yīng)后，繼續(xù)加熱到90℃，過濾得米曲汁，備用；米曲汁加瓊脂1.8%~2%，加熱溶解后，分裝于試管中，加棉塞，高壓滅菌30min后放置成斜面，待其凝固后，在32℃保溫箱中培養(yǎng)干燥5～7d，等試管壁上無凝結(jié)水，培養(yǎng)基上無雜菌后即可使用。在無菌條件下，向試管斜面培養(yǎng)基上接曲霉菌孢子少許，在32℃保溫箱中培養(yǎng)6d，等孢子成熟后，檢查有無雜菌，取出放在冰箱中備用。

　　2.葡萄糖豆芽汁培養(yǎng)基的制備

　　將黃豆用水沖洗干凈，浸泡12～15h（夏季應(yīng)注意換水l~2次），使黃豆吸水膨脹。然后倒去余水，放于瓷盤等容器內(nèi)，上蓋濕布，20~25℃保溫，每天用溫水沖洗1～2次，至芽長(zhǎng)5cm左右時(shí)即可使用。黃豆發(fā)芽的另一個(gè)方法是將浸泡過的黃豆放在用水拌濕的鋸木屑內(nèi)，黃豆即可發(fā)芽生長(zhǎng)。該法優(yōu)點(diǎn)是生長(zhǎng)過程中不需要管理，而且生長(zhǎng)迅速。也可買市售的黃豆芽。洗凈的黃豆芽lOOg，加水1OOOmL，煮沸40min，用紗布過濾，濾液用水補(bǔ)充至原來的體積(lOOOmL)，即為10%的豆芽汁。如加入適量的葡萄糖，則為葡萄糖豆芽汁培養(yǎng)基。

　　3．麥芽汁培養(yǎng)基的制備

　　普通大麥浸泡1d，置于木制或草制筐內(nèi)，面上蓋1層濕布，保溫20℃左右，每天沖水1~2次，至芽長(zhǎng)為大麥本身的1倍時(shí)，即可風(fēng)干，搗碎，制成大麥芽粉。也可買現(xiàn)成的麥芽。lkg大麥芽粉，加55~60℃溫水4kg左右，在55~60℃水浴鍋中保溫糖化3～4h，至液體中加碘無淀粉反應(yīng)為止（檢查方法同米曲汁制備）。再用紗布過濾，裝瓶加棉塞，并包扎油紙，0.1MPa蒸汽高壓滅菌25~30min，殺菌后雜質(zhì)沉淀，貯存?zhèn)溆谩?

　　麥芽汁制備的另一個(gè)方法是稱取大米0.5kg，加水3~3.5kg，煮成稀飯，涼至60℃，加麥芽粉0.5kg，攪拌均勻，55~60℃保溫，水浴鍋糖化4～6h，過濾，所得濾液即為麥芽汁。其濃度約為13°Bx。這種方法一般在麥芽供應(yīng)不足時(shí)采用。

　　4．葡萄糖馬鈴薯培養(yǎng)基制備

　　將馬鈴薯去皮切成薄片，切片后立即浸于水中，以免氧化變黑。每200g馬鈴薯加自來水lOOOmL，加熱至80℃，熱浸1h。用紗布過濾，濾液用水補(bǔ)足至1OOOmL，加入5%葡萄糖，攪拌溶解，即為葡萄糖馬鈴薯培養(yǎng)基。若馬鈴薯煮得過爛，則對(duì)菌生長(zhǎng)不利。本培養(yǎng)基適用于根霉及產(chǎn)酯酵母的培養(yǎng)。如能以30%～40%的比例與麥芽汁或米曲汁混合使用則更好。

　　5．甜酒水培養(yǎng)基

　　將糯米淘洗干凈，浸泡后蒸煮成飯，冷涼至30℃左右拌入根霉甜酒曲（不含酵母），裝入清潔容器內(nèi)，保溫30℃培養(yǎng)1～2d后即成甜酒釀，煮沸后過濾，濾液即為甜酒水培養(yǎng)該培養(yǎng)基含葡萄糖較多，若制成固體培養(yǎng)基累代培養(yǎng)，將使霉菌糖化力和酵母發(fā)酵力下降，故多用于生產(chǎn)上作擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)的三角瓶種子液用。

　　6．麩皮固體培養(yǎng)基

　　將較粗的麩皮加水70%~80%，充分拌勻，裝入試管或三角瓶，裝入量不宜過多或過少。然后用試管刷將附于試管壁上的麩皮刷干凈，塞上棉塞，0.1MPa滅菌40min，即為麩皮固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基應(yīng)隨做隨用。

　　若需將上述培養(yǎng)液制成試管斜面固體培養(yǎng)基，應(yīng)先將瓊脂稱好洗凈，煮沸培養(yǎng)液，在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂（瓊脂用量一般為1.5%～2%），并不斷攪拌直至完全融化為止；溶解加熱時(shí)要注意火候，避免過熱煳底燒焦及防止溢出。當(dāng)瓊脂溶化后，再加入熱水補(bǔ)足所蒸發(fā)的水分（可事先做好標(biāo)記），然后用兩層紗布中間夾脫脂棉趁熱過濾。若冬天氣溫低容易凝固，可用熱濾漏斗過濾，過濾完畢，趁熱進(jìn)行分裝，取大號(hào)玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下端連接一段橡皮管，管端與玻璃管嘴相接。橡皮管中間裝一個(gè)彈簧止水夾，將整個(gè)裝置安裝在鐵架上。分裝時(shí)用左手夾住空試管的中部，將試管伸人漏斗下的試管內(nèi)，以右手拇指及食指開放彈簧止水夾，使培養(yǎng)液流入試管內(nèi)。注意不使培養(yǎng)基沾污試管上段管壁，以免沾污棉塞，引起雜菌污染。裝入試管的培養(yǎng)基量視試管大小及需要而定。如用做保存菌種用的斜面，則裝SmL左右（15mm×150mm試管），為試管長(zhǎng)的1/5~1/4。如用做平板用的大試管（20mm×200mm規(guī)格試管），則裝12~15 mL。分裝完畢，塞上棉塞。棉塞能過濾空氣，避免污染。做棉塞要松緊合適，緊貼管壁不留縫隙，以防空氣中雜菌沿縫隙侵入試管內(nèi)。棉塞不宜過小，以免脫落，其2/3的長(zhǎng)度應(yīng)在試管內(nèi)部，上部露出少許棉花，便于拔放。做棉塞用普通棉花即可�？稍诿奕�外加兩層紗布包住，這樣可延長(zhǎng)使用時(shí)間。

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